Hepatitis B-virus spredes fra person til person via kropsvæsker eller blod, der indeholder smitte. Det kan ikke spredes via luften, mad eller vand. En nyfødt kan være smittet ved fødslen, hvis moderen er smittet. Infektion kan også spredes fra et barn til et andet ved tæt kontakt og fra en voksen til en anden voksen via seksuel aktivitet eller brug af kontaminerede kanyler. Andre mulige smitteveje omfatter medicinsk behandling i lande, hvor der anvendes kontaminerede kanyler eller kontamineret blod. Det er især vigtigt at forhindre spredning af virussen fra mor til barn og fra barn til barn, fordi kronisk hepatitis B-infektion (med forøget risiko for leverkræft) er meget mere udbredt, hvis infektionen er sket i barnets 5-10 første leveår.